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原代细胞培养中常见的问题有哪些

发表时间:2022-03-24 14:01

  根据传统定义,通过自组织收集和接种的细胞称为原代细胞。这些细胞直接与组织分离,生命周期有限,经过几次传代后逐渐停止生长。原代细胞需要在有限的生命周期内获得细胞生长空间,以保持细胞群的基因型和表型一致性。

原代细胞

  细胞系是一组不断生长分化的细胞,其基因改造具有无限的生长潜力。体外培养的细胞系用于医学或科学研究。

  倍增和代数有什么区别?

  倍增是培养物中细胞总数的翻倍,通常指的是细胞指数或对数生长期。代数是细胞群从培养瓶中取出的次数和传代过程,传代的目的是保持细胞密度低,促进进一步增殖。

  接收到的冻存细胞该如何处理?

  收到包装后,立即将冷冻保存的细胞从干冰转移到液氮中并冷冻保存。该过程尽可能快地完成以避免加热。不要将细胞储存在-80°C,因为它们会对细胞造成无法修复的损坏。

  如何开始培养冷冻细胞?

  (1) 从液氮罐中取出装有细胞的管子,注意保护手和眼睛。

  (2)将冻存管迅速放入37℃水浴中,轻轻旋转,直至管内内容物完全融化。

  (3) 立即将冷冻管从水箱中取出,擦干,转移到无菌环境中。

  (4) 用 70% 酒精清洗冷冻管并擦去多余的酒精。

  (5)打开盖子注意不要碰到里面的螺纹(低温恒温管的负压在打开盖子时可能会造成少量溢出,但这是正常操作)。

  (6) 用聚赖氨酸包被培养瓶(或参照说明书)。大多数细胞的推荐接种密度为每平方厘米 5000 个细胞。

  (7) 盖上培养瓶盖,轻轻摇晃培养瓶,使细胞分布均匀。如果需要换气,可以打开盖子。

  (8) 将培养瓶置于培养箱中(37°C,5% CO2,95%空气)。

  (9) 放入培养箱后6~16小时,换液一次,去除残留的二甲亚砜和未贴壁的细胞。


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