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慢病毒包装

技术简介:慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒科亚科之一。慢病毒载体是以慢病毒为骨架,将其中和病毒活性相关的多个序列结构去除,再在这个基因组骨架中引入实验所需要的目的基因的序列和表达结构,将其制备成具有生物学的安全性的载体。由慢病毒改建而来的慢病毒载体因其高效稳定的转染效率成为常用的研究工具。

慢病毒载体基因组是正链RNA,其基因组进入细胞后,在细胞浆中被其自身携带的逆转录酶逆转录为DNA,形成DNA整合前复合体,进入细胞核后,DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录mRNA,回到细胞浆中,表达目的蛋白或产生RNAi干扰。

技术方法

1. 包装与纯化方法

十指生物慢病毒载体采用的是四质粒系统,该系统转染293T细胞后,可在细胞上清中收获只有一次性感染能力而无复制能力的慢病毒载体颗粒。所获得的病毒颗粒再经过超速离心纯化。此外,十指生物拥有自主研发的慢病毒包装体系和配套的包装试剂盒,包装出来的慢病毒具有高滴度、高效率、高荧光的“三高”的特色。

2. 滴度检测方法

传统的P24试剂盒检测法虽然简单快捷,但是检测的物理滴度会造成滴度虚高,十指生物采用流式检测GFP荧光法和绝对定量qpcr法进行滴度检测,该方法能够检测活性病毒的感染滴度,具有重复性好,结果准确等优点。十指生物包装后的慢病毒,检测滴度是市面上生物公司平均包装滴度的2到3倍。

技术特点

慢病毒载体具有以下特点:

转染效率高————慢病毒是RNA逆转录病毒,能感染一些较难转染的细胞。

表达时间长————慢病毒将目的基因整合到宿主基因组内,可实现基因长时间稳定的表达,不随细胞分裂传代而丢失,因此常用于构建稳转株。

安全性高   ———— 四质粒系统使包装的病毒大部分转录失活,即使发生基因组重组,病毒也不可能进一步复制,生物安全性大大提升。

        应用范围广————慢病毒不仅可直接用于体外感染细胞,也能直接注射用于活体组织,进行动物实验。

不同病毒载体的特点比较

载体选择

十指生物专注于慢病毒包装、质粒构建、蛋白检测、细胞功能学实验等技术服务和产品开发,拥有大量的慢病毒载体,可用于操作编码基因和非编码基因,如lncRNA、microRNA、circRNA,如下慢病毒载体可供您选择(包括但不限于此列表):

质量控制

慢病毒质量检测标准:

十指生物设立专门的质检部门,严格测定每一生产批次慢病毒的活性滴度。且生产出来的慢病毒都会感染293T细胞进行实验验证,只有各项指标都没有问题后,才会进行发货。

十指优势

诚信————公司以诚信为本,确保实验真实可靠,数据准确

专业————研究团队专业,公司产品的生产和技术研究由博士专家带领

高效————生产流程改良后,时间大大缩短,整体服务周期缩短,发货迅速

创新————创新为公司核心价值观,不断进行技术改进和流程优化,不断研究新的技术方案

贴心————拥有专人对服务跟进,客户可实时掌握进度

服务流程

简单轻松,沟通一步到位,信息实时反馈


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